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    PCR在臨床中的應(yīng)用(三)

    發(fā)布時間: 2009-08-03  點(diǎn)擊次數(shù): 3104次

     對于梅毒(TP)的診斷:敏感性、特異性均高。一般用來做確證試驗。不能用于觀察療效:即使患者經(jīng)過足夠的抗梅治療,血清學(xué)反應(yīng)仍可保持陽性,甚至保持終生。

      目的探討聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反向膜雜交技術(shù)檢測臨床標(biāo)本中結(jié)核分支桿菌(TB)DNA的價值.方法用PCR反向膜雜交技術(shù)檢測522例結(jié)核及60例非結(jié)核患者臨床標(biāo)本中的TBDNA,同時用培養(yǎng)、抗酸染色涂片及常規(guī)PCR法作對照.結(jié)果PCR反向膜雜交法陽性率為80.6%(411/690),培養(yǎng)為18.1%(125/690),鏡檢為13.9%(96/690),常規(guī)PCR為59.6%(411/690),PCR反向膜雜交法與常規(guī)法比較(P<0.001=,差異有顯著意義.PCR反向膜雜交法陽性檢出率高于常規(guī)PCR(P>0.05),但差異無顯著意義;該技術(shù)假陽性為零.結(jié)論P(yáng)CR反向膜雜交技術(shù)檢測臨床標(biāo)本中TB-DNA具有快速、高度特異性和敏感性,可為結(jié)核病的臨床早期診斷提供一種新的病原學(xué)診斷手段.

       近年來聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)已經(jīng)用于Hp的診斷,該技術(shù)的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍,可以檢出少至100個Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測出,為PCR特異性引物的選擇提供了依據(jù)。我們以一對與16SrRNA基因互補(bǔ)的寡核苷酸為引物(CP1/CP2),建立了從胃粘膜活組織標(biāo)本中檢測Hp感染的PCR技術(shù)。用該方法檢測Hp標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC 11637,NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產(chǎn)生450bp的片段,其敏感性為0.1pg的HpDNA,相當(dāng)于100個細(xì)菌細(xì)胞 ,而對12株非Hp菌株(包括金葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351)以及無Hp感染的人胃粘膜細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。我們還用PCR檢測了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者,結(jié)果表明PCR檢查的Hp陽性率高于常規(guī)檢查法。我們還對17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查(尿素酶試驗、銀染、及培養(yǎng)均陰性)而被認(rèn)為Hp被*的病人,用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽性。以往我們對一些常規(guī)方法未能檢出而實際上還存在Hp的病人,誤認(rèn)為Hp被*而放棄治療,這些病人短期內(nèi)Hp再現(xiàn)實際上是治療不*,這對于指導(dǎo)Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。
     
       HCMV感染是器官移植受者術(shù)后常見并發(fā)癥之一。HCMV感染系全身感染,臨床表現(xiàn)多樣,與移植排斥反應(yīng)的臨床癥狀十分相似,易于混淆,但二者的產(chǎn)生條件截然相反,在治療上*不同。要弄清器官移植術(shù)后受者的臨床癥狀是否由HCMV感染所致,及時診斷活動性HCMV感染非常重要。HCMV感染是影響器官或組織移植成敗的重要因素。特別在骨髓移植感染中,如不及時診治,??梢鹬旅kU和移植失敗。因此早期診斷和及時有效的預(yù)防性治療是降低移植術(shù)后HCMV病發(fā)生率和死亡率的關(guān)鍵。熒光定量PCR技術(shù)對HCMV DNA的檢測對感染的檢測具有臨床應(yīng)用價值,因為體液中病毒DNA先于病毒感染的臨床癥狀或血清學(xué)證據(jù)的出現(xiàn),可作為HCMV感染的早期指標(biāo),對于HCMV感染疾病的治療和預(yù)防具有重要的意義。由于HCMV可通過胎盤內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等途徑傳播,而且受感染的新生兒死亡率較高,因此利用PCR進(jìn)行早期診斷及采取及時的治療措施,對優(yōu)生優(yōu)育也有重要意義。目前對HCMV感染疾病的治療和預(yù)防主要采用抗病毒藥物。顯然對抗病毒藥物的療效需要有有效的觀察和評價手段。熒光定量PCR對HCMV DNA可進(jìn)行定量分析,檢測指標(biāo)穩(wěn)定,通過對DNA血癥水平的動態(tài)觀察以監(jiān)測HCMV疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后,及時調(diào)整免疫抑制劑的用量,指導(dǎo)抗病毒治療,觀察療效,分析是否有耐藥等,因此可作為評價各種抗病毒藥物療效的有力手段。




    附錄:
    PCR在臨床中的應(yīng)用(二)
    PCR在臨床中的運(yùn)用(一)

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